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純化標(biāo)簽蛋白時(shí)填料的選擇

更新時(shí)間:2022-06-09 點(diǎn)擊次數(shù):1174

基因工程提供了人們改變蛋白質(zhì)性質(zhì)的機(jī)會(huì),因而可以借此改善蛋白質(zhì)的純化特性。通過在目的DNA的3’端或5’端插入DNA序列,可以改變蛋白質(zhì)兩端的氨基酸序列,進(jìn)而作為可純化的融合蛋白。這些融合子可幫助蛋白質(zhì)形成包含體,用于穩(wěn)定蛋白質(zhì),免受蛋白酶的攻擊,還可以賦予蛋白質(zhì)特定的純化性質(zhì),使其適用于免疫親和、金屬螯合、離子交換、疏水色譜以及其他分離操作。此外,對于已知特性的蛋白質(zhì),改變其中特氨基酸可引入具有特定基質(zhì)吸附親和力的片段。


圖片

市面上有兩種很常見的標(biāo)簽,分別為組氨酸標(biāo)簽GST標(biāo)簽,這兩種標(biāo)簽可插入蛋白形成重組蛋白,月旭科技現(xiàn)有針對這兩種標(biāo)簽蛋白純化的填料可供選擇。

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His-Tag(組氨酸標(biāo)簽)是重組蛋白表達(dá)zui常用的標(biāo)簽,無論表達(dá)的蛋白是可溶的或者包涵體都可以用固定金屬離子親和層析純化。6×His-tag是指六個(gè)組氨酸殘基組成的融合標(biāo)簽,可插入在目的蛋白的C末端或N末端。

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純化組氨酸標(biāo)簽蛋白zui常用的配體是亞氨基二乙酸(IDA)和次氨基三乙酸(NTA),可使用月旭科技Ni Tanrose 6FF(NTA)或Ni Tanrose 6FF(IDA)來純化。

技術(shù)參數(shù)

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谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)是一種親和標(biāo)簽,用GST標(biāo)記真核蛋白可增強(qiáng)融合蛋白的溶解性。此外,帶有 GST 標(biāo)簽的蛋白可以在細(xì)菌中高水平表達(dá),但可能會(huì)由于蛋白聚集而形成包涵體。一般將GST標(biāo)簽添加到目標(biāo)蛋白質(zhì)的N或C末端。 

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GST對谷胱甘肽具有很相對強(qiáng)的親和力,這意味著可以在固定的基質(zhì)(如鍵合谷胱甘肽的填料)上捕獲GST蛋白融合物。這種結(jié)合特性可用于蛋白質(zhì)純化以及通過蛋白質(zhì)的結(jié)合,來捕獲對應(yīng)的蛋白質(zhì)。因此可使用月旭科技GST Tanrose 4FF來純化GST標(biāo)簽蛋白。

技術(shù)參數(shù)

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